在熒光顯微鏡領(lǐng)域,激發(fā)濾光片、二向色鏡以及發(fā)射濾光片一般集成于同一立方體內(nèi),其設(shè)計初衷是適配特定的熒光團(tuán)或熒光蛋白光譜。不過,在某些特殊情形下,濾光片也可能脫離立方體,轉(zhuǎn)而安裝在被稱為濾光片轉(zhuǎn)盤的轉(zhuǎn)輪之上。
借助濾光片轉(zhuǎn)盤,使用者能夠靈活地進(jìn)行混合搭配,以精準(zhǔn)匹配所需的激發(fā)與發(fā)射波長。其核心目的在于精準(zhǔn)捕獲結(jié)合靶標(biāo)的熒光基團(tuán)所發(fā)出的光信號,同時有效屏蔽系統(tǒng)內(nèi)其他無關(guān)光線,如環(huán)境光以及激發(fā)光源產(chǎn)生的光線等。
那么,熒光成像所運(yùn)用的濾光片究竟包含哪些類型呢?
通常而言,濾光片組的設(shè)計旨在捕捉特定熒光團(tuán)的最大激發(fā)與發(fā)射波長,但并非能夠捕獲全部熒光。大多數(shù)現(xiàn)代濾光片組的設(shè)計理念是保障激發(fā)濾光片僅允許特定波長區(qū)間的光線順利通過,這類濾光片即為帶通濾光片。
帶通濾光片一般依據(jù)中間波長和區(qū)間寬度予以確定。在較為簡易的熒光顯微鏡裝置中,激發(fā)光線一旦穿越激發(fā)濾光片,便會徑直照射到靶標(biāo)之上,靶標(biāo)上的熒光基團(tuán)旋即進(jìn)入激發(fā)態(tài),隨后發(fā)射出向光譜紅外端(相較于激發(fā)光線)遷移的光線。但并非所有此類發(fā)射光線都能被檢測器所捕捉,唯有那些能夠順利穿過二向色鏡且符合發(fā)射濾光片要求的光線才能被成功檢測。
發(fā)射濾光片通常可分為帶通濾光片或者長波通濾光片,具體的選擇取決于特定的熒光團(tuán)以及成像實(shí)驗(yàn)的要求。倘若使用者期望讓超過特定波長的光線抵達(dá)檢測器,那么長波通濾光片無疑是合適之選。
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